ABSTRACT
CONTEXT AND OBJECTIVE: Counting and separating hematopoietic stem cells from different sources has importance for research and clinical assays. Our aims here were to characterize and quantify hematopoietic cell populations in marrow donors and to evaluate CD34 expression and relate this to engraftment. DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study on hematopoietic stem cell assays, using flow cytometry on donor bone marrow samples, for allogenic transplantation patients at two hospitals in São Paulo. METHODS: Immunophenotyping of marrow cells was performed in accordance with positive findings of CD34FITC, CD117PE, CD38PE, CD7FITC, CD33PE, CD10FITC, CD19PE, CD14FITC, CD13PE, CD11cPE, CD15FITIC, CD22PE, CD61FITC and CD56PE monoclonal antibodies in CD45PerCP+ cells, searching for differentiation and maturation regions. CD34+ sorting cells were analyzed for CD38 and CD117. Rh-123 retention was done before and after sorting. Antigen expression and CD34+ cells were correlated with engraftment. RESULTS: In region R1, 0.1 percent to 2.8 percent of cells were CD34+/CD45+ and 1.1 percent, CD34+/CD45-. The main coexpressions of CD45+ cells were CD38, CD22, CD19 and CD56 in R2 and CD33, CD11c, CD14, CD15 and CD61 in R3 and R4. After sorting, 2.2x10(6) CD34+ cells were equivalent to 4.9 percent of total cells. Coexpression of CD34+/CD38+ and CD34+/CD117+ occurred in 94.9 percent and 82 percent of events, respectively. There was a positive relationship between CD34+ cells and engraftment. More than 80 percent of marrow cells expressed high Rh-123. CD34+ cell sorting showed that cells in regions of more differentiated lineages retained Rh-123 more intensively than in primitive lineage regions. CONCLUSION: We advocate that true stem cells are CD34+/CD45-/CD38-/low-Rh-123 accumulations.
CONTEXTO E OBJETIVO: A contagem e separação de células-tronco hematopoéticas de diferentes fontes tem importância para ensaios clínicos e pesquisa basica. Nosso objetivo foi caracterizar e quantificar as populacões de células hematopoéticas, bem como avaliar a expressão do antígeno CD34 em populações mais primitivas e correlacioná-las com a enxertia nos doadores de medula óssea para transplante alogênico. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal no qual a diferenciação e a seleção de células-tronco hematopoéticas foram realizadas em amostras de medula óssea de doadores de pacientes submetidos a transplante alogênico nos Hospitais São Paulo e Santa Marcelina, São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Imunofenotipagem de células mononucleares de medula óssea foi feita na população de células CD45PerCP+ com os seguintes anticorpos: CD34FITC, CD117PE, CD38PE, CD7FITC, CD33PE, CD10FITC, CD19PE, CD14FITC, CD13PE, CD11cPE, CD15FITC, CD22PE, CD61FITC e CD56PE. Após a definição de regiões de células positivas ao CD34, estas células foram selecionadas e analisadas para a co-expressão do CD38 e CD117. Células mononucleares totais de medula óssea e aquelas obtidas após a seleção foram testadas para a retenção de Rh-123. O teste de Friedman e o coeficiente de Sperman foram utilizados para comparar as expressões e correlacionar a contagem de células CD34+ com a enxertia. RESULTADOS: Na região R1, 0,1 por cento a 2,8 por cento das células foram CD34+/CD45+, porém apenas 1,1 por cento das células foram CD34+/CD45-. As principais co-expressões de células CD45+ foram CD38, CD22, CD19 e CD56 na região R2 e CD33, CD11c, CD14, CD15 e CD61 nas regiões R3 e R4. Após a seleção, a mediana de 2,2x106 células CD34+ foi equivalente a 4,9 por cento do total mediano de células da medula óssea. Co-expressões de células CD34+/CD38+ e CD34+/CD117+ ocorreram em 94,95 e 82 por cento, respectivamente. Houve relação positiva entre o número de células CD34+ infundidas e o dia da enxertia. ...